采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附檢測技術。特異性抗人TNF-α抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品和待測樣本，經過孵育，樣本中存在的TNF-α與固相抗體結合。洗滌去除未結合的物質后，加入生物素化的檢測抗體孵育。洗滌去除未結合的生物素化的抗體，加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素 (Streptavidin-HRP)。洗滌后，加入信號增強劑孵育，洗滌去除未結合的物質后，再次加入Streptavidin-HRP。洗滌后，加入顯色底物TMB，避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中TNF-α的濃度成正比。加入終止液終止反應，在450 nm波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。
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